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hiv确诊实验结果不确定(一)
34例HIV确认检测不确定、阴性结果与初筛结果比较分析
34例ＨＩＶ确认检测不确定、阴性结果与初筛结果比较分析 HIV抗体检测是发现传染源并进行有效管理的基础,HIV感染的诊断对遏止艾滋病的游行具有十分重要的作用。近年来,国产双抗原夹心HIVELISA试剂已在疾控中心、医院、血站、妇幼保健院等初筛实验室广泛应用。按照《全国艾滋病检测工作规范》要求,HIV抗体必须用两种初筛试剂检测阳性、一阴一阳者经确认(WB)实验确认,才能诊断为艾滋病病毒感染者。为探讨初筛实验S/CO(OD值与临界值的比值)值与确认试验之间的关系及规律,我们对2008年34例HIV确认试验结果不确定、阴性结果进行总结,分析了初筛检测结果的S/CO值与确认结果相关性,现报告如下。
1材料与方法
1.1样本
来自全州各县(市)疾病预防控制中心HIV初筛实验室经两种试剂(万泰、丽珠均由贵州省艾滋病防所提供)初筛、复筛送检的HIV抗体阳性、一阴一阳血清标本。
1.2确认试剂
HIV1+2型免疫印迹法(WB)试剂,MP生物医学亚太私人有限公司生产(由贵州省艾防所提供),有效期内使用,严格按照试剂盒说明书操作,并按照说明书判定标准判定结果,同时参考《全国艾滋病检测工作规范》中的判定标准。
1.3方法
将确认结果分成两组,第一组确认实验结果不确定;第二组确认实验结果为阴性,与初筛、复初筛的S/CO值进行对比分析。
2结果
34份样本中,初筛单一试剂检测HIV阳性29例,WB确认实验结果不确定21例,阴性8例,OD值与临界值(cutoff)的比值(S/CO)≥6.0以上15例。复筛单一试剂检测HIV阳性14例,WB确认实验结果不确定10例,阴性4例,OD值与临界值
hiv确诊实验结果不确定(二)
HIV抗体免疫印迹试验不确定结果
HIV抗体免疫印迹试验不确定结果 的血清学特征及病毒载量辅助诊断的意义研究
缪礼锋，沈月兰，吴建军，程晓莉，苏斌
（安徽省疾病预防控制中心，合肥230601）
【摘要】 目的 研究HIV抗体蛋白印迹试验不确定标本的血清学特征，比较血清学和核酸定量方法对不确定结果的鉴别效果，为HIV抗体不确定结果的随访处置和诊断提供依据。方法 以安徽省艾滋病确证中心实验室2003-2014年确证为“HIV抗体不确定”并有随访结果的298例标本为研究对象，对首次和随访标本同时进行蛋白印迹试验和必要的核酸检测，综合两次检测结果和流行病学史资料，来判定标本HIV感染的真实状况；检测并记录胶体金快速试验结果、ELISA的S/CO比值、WB带型特征（强度）和病毒载量值，结合流行病学资料将不同方法结果进行比较和验证。结果 （1）298例HIV抗体不确定病例中共有19种带型，其中最常见三种：p24（48.0%）、gp160（24.2%）、gp160 p24（12.4%）。 (2)298例不确定标本中发现28例病毒感染者，其中血清阳转24例，带型不进展但核酸持续阳性者4例。（3）不确定标本中270例真阴性标本和28例真阳性标本S/CO值均值有显著性差异；蛋白印迹试验条带强度越强阳性比例越高，所有gp160 gp120带型后续随访全部为HIV病毒感染者；胶体金检测不确定标本的敏感性和特异性分别为96.4%和88.5%。（4）病毒载量检测不确定标本的敏感性和特异性分别为96.4%和99.6%，假阳性和假阴性结果各1例，随访病毒载量检测敏感性和特异性均达100%。 结论 （1）根据抗体筛查检测结果和确证带型特征与强度，可以对不确定结果进行初步评估；（2）不确定病例中关键带型反应强度越大，感染的风险越高；针对env带的不确定标本预示有较大的感染风险，尤其是gp160 gp120和gp160 p24两种带型，须做进一步的随访和鉴别诊断；（3）不确定结果随访8周以上带型不进展也不能完全排除为阴性，应当视情况使用其他方法进行鉴别诊断。（4）病毒载量检测是鉴别不确定标本的有效方法，当缺少流行病学资料支持时，也要警惕假阳性和假阴性结果的可能。
【关键词】艾滋病病毒；不确定结果；蛋白印迹；确证；病毒载量
Study on the indeterminate results of serological characteristics of HIV antibody from Western blot test and The significance of diagnosis by HIV-1 plasma viral loads. MIAO Lifeng，SHEN Yuelan,，WU Jianjun，et al.(Anhui Provincial Center for Disease Control and Prevention，Hefei 230601，Anhui,China)
Abstract: Objective To study the serological characteristics of HIV antibody from Western blot test and to compare the results of serological and nucleic acid quantitative methods for the identification of the results of the indeterminate results, providing the basis for the follow-up treatment and diagnosis of HIV antibody. Methods both of the first time and follow up samples of the 298 subjects who were confirmed as indeterminate HIV antibody in Anhui provincial Center of HIV Confirmation Laboratory from 2003 to 2014, were collected．the results of Western blot test and nucleic acid detection were performed to determine the true state of HIV infection, and to detect and record the fast test results, S/CO value of ELISA, WB bands patterns (intensity) and viral load value, and the results were compared and verified by epidemiological data Results (1) there were 19 types of in 298 cases of HIV, three of which were the most common: p24 (48%), gp160 (24.2%), p24 gp160 (12.4%). (2) 28 cases of viral infection were found in 298 cases, including 24 cases with positive serum and 4 cases with positive nucleic acid. (3) there were significant differences in the mean value of S/CO in 270 cases of true negative and 28 cases of true
positive. With the increase of the intensity of the WB reaction, the positive rate was also increased. All the subjects of gp120 gp160 bands followed up for HIV virus infection; the sensitivity and specificity of fast test were 96.4% and 88.5%,.(4) the sensitivity and specificity of viral load test were 96.4% and 99.6%, and the sensitivity and specificity of the The second viral load test were 100%. Conclusions (1) according to the results of antibody screening test and the characteristics and intensity of Western blot bands, we can make a preliminary assessment of the results. (2) The greater the intensity of the critical bands in the case, the higher the risk of infection．Env indeterminant were with the greater predictive value of HIV infection．especially the gpl60p24 and gpl60 gp120．Need to do follow-up and differential diagnosis.(3)the patients with no progress bands in the follow-up for more than 8 weeks could not be directly diagnosed as negative. Other methods should be considered for differential diagnosis.(4) Viral load assay can be applied to discriminate HIV antibody indeterminant, and when the lack of epidemiological data supports, it should be alert to the possibility of false positive and false negative results. Keywords HIV; indeterminate result; Western blot; confirmation; viral load
HIV血清学抗体检测是艾滋病实验室诊断的最常用方法，它分为筛查试验和确证试验两个步骤，筛查检测目前常用的方法包括酶联免疫吸附实验（ELISA）、快速检测法（RT）和化学发光或免疫荧光法，确证试验一般常用免疫印迹法（WB）。根据卫生部发布的行业标准[1]规定：成人和大于18月龄的儿童或青少年HIV抗体确证试验阳性即可诊断，确证试验可做出HIV抗体阳性、阴性和不确定三种结果, 行标建议不确定结果三个月后再次进行检测。而《全国艾滋病检测技术规范》（2009版）将随访时间进一步缩短为4周，规定：HIV抗体不确定结果可以结合流行病学资料，在4周后随访检测，如带型没有进展或呈阴性反应，则报告阴性；如随访期间出现阳性反应，则报告阳性；如随访期间带型有进展，但不满足阳性标准，应继续随访到8周。如带型没有进展或呈阴性反应则报告阴性；满足HIV抗体阳性诊断标准则报告阳性，不满足阳性判断标准可视情况决定是否继续随访。为此本研究就安徽省十年来不确定标本的血清学特征和核酸鉴别诊断结果做了相应的比较分析和探讨。
1 材料与方法
1.1 研究对象 收集2003年1月到2014年9月送往安徽省HIV确证中心实验室初次确证试验为HIV抗体不确定的298份标本，且所有病例均有随访采样。
1.2 检测试剂 人类免疫缺陷病毒抗体检测试剂盒（胶体金法，韩国SD 批号：023468B）；人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（双抗原夹心ELISA法，珠海丽珠，批号：2014051212），使用仪器为Authos 2010酶标仪和Authos fluido 洗板机,由奥地利AuthosLabtec Instruments公司生产；人类免疫缺陷病毒(HIV 1+2型)抗体检测试剂盒(免疫印迹法，新加坡MP生物医学亚太私人有限公司，批号：AE4008)，使用仪器为ProfiBlot 48自动蛋白免疫印迹仪，由奥地利TECAN公司生产；HIV病毒载量检测为NucliSens EasyQ试剂（HIV RNA定量，法国生物梅里埃,批号：285033），使用核酸定量检测仪NucliSens EasyQ Analyzer，最低检测限为50IU/ml,以上试剂均按照试剂盒说明书要求操作并判读结果。
1.3 实验方法 检测并记录快速试验结果、ELISA反应的S/CO比值、蛋白印迹试验的带型，同时对蛋白印迹试验的带型强度进行评分，根据《艾滋病和艾滋病病毒诊断标准》（WS293-2008）和《全国艾滋病检测技术规范》（2009版）的规定，WB确证试验结果阳性判断中最为关键的四条带型分别是gp160、gp120、gp41和p24，因此本研究以阳性对照为标准，对四条关键带型进行评分，评分规则：以试剂盒中自带的强阳性和弱阳性对照作为WB条带反应强度的判定标准[分别代表4分(强阳性)和2分(弱阳性)]，据此将样本的WB条带反应强度得分由低到高依次分为0分(阴性)、1分(强于阴性，但弱于弱阳性)、2分(弱阳性相当)、3分(强于弱阳性，但弱于强阳性)、4分(强阳性相当)，由2名以上检测人员肉眼观察每个样本各条带的反应强度，观察结果的平均值计算得分；组合条带得分是所属区内各条带反应强度得【hiv确诊实验结果不确定】
分之和。
对随访期间带型或强度有进展（或变化）的病例标本进行病毒载量检测，随访期间带型不进展的标本进行集合核酸检测，样品采用三级集合策略，25份血浆标本混合形成一份一级集合样品：每份样品取210µl，移入标记二级集合的去RNA酶的离心管中；再从5个二级集合管中分别吸取210µl样品，移入标记一集集合的去RNA酶的离心管中。对每份一级集合样品分别进行核酸检测，若为阴性则终止筛查；若为阳性则进行拆分检测，直至确定阳性样品。
2 结果
2.1. 不确定结果的人口社会学基本特征
主要人群有学生、干部、军人、普通职员等无偿献血员和其他受检人员；297例中男性159人，女性137人，不详2人，男女性别比为1.16:1，年龄分布中最小的5岁，最大的82岁，年龄组分布以15-44岁之间最多，其中15-24岁、25-34岁、35-44岁和大于45岁年龄段分别有92例（30.9%）、65例（21.8%）、53例（17.8%）和54例（18.1%）；职业以农民或农民工（21.8%）和学生（19.8%）居多；样本来源以无偿献血员最多，有126例，占42.3%。具体见表1。
表1 不确定标本人口社会学特征
Table 1 Demographic and sociological characteristics of the indeterminate specimens
人群特征
例数 case 159 137 2 4 92 65 53 54 30 59 29 65 6 2 30 5 3 20 79 126 31 13 13
构成比（%） proportion
53.36 45.97 0.67 1.34 30.87 21.81 17.79 18.12 10.07 19.80 9.73 21.81 2.01 0.67 10.07 1.68 1.01 6.71 26.51 42.28 10.40 4.36 4.36
characteristics
性别 Sex 男 Male 女 Female 不详Unknown 年龄 Age ≤14 15-24 25-34 35-44 ≥45
不详 Unknown 职业 Occupation 学生 student 工人 worker
农民或农民工 Farmers or migrant workers 个体户 Self-employed person 司机 Driver
公务人员或职员 Official or employee 医务人员Medical personnel
娱乐场所服务人员Entertainment service personnel 无业Unemployed persons 不详Unknown 样本来源 Sample source
无偿献血员Voluntary blood donors 有偿供血（浆）者Paid blood donors 羁押人员Prisoner
咨询检测Counseling and testing
术前检测或体检者Preoperative examination or physical examination 其他就诊者Other clinic 孕产妇Pregnant women 吸毒者drugger
男男同性恋者 Man sexy with man
感染者配偶或子女Spouse or child of infected persons 不详Unknown
15 41 6 2 11 6 34
5.03 13.76 2.01 0.67 3.69 2.01 11.41
2.2不确定结果的带型特征和强度：在298例不确定标本中有19种不同的反应带型，最多的是p24,有143例，占48.0%，其次是gp160,有72例，占24.2%，gp160 p24也有37例，占12.4%这三种带型占总不确定标本比例达到84.6%，是本研究中常见的不确定带型。
从不确定标本的带型反应强度来看，1分有199例，占66.8%，2分有46例，占15.4%，两者合计占82.2%。不确定标本的带型构成和不同带型反应强度百分比见表2。其中“±”表示带型反应强度非常弱，两人判读结果不一致。
表2 HIV抗体不确定标本的带型构成及不同带型反应强度百分比
Table 2 the proportion of indeterminate results and the percentage of the reactive intensity
反应强度(gp160/gp120/gp41/p24)
构成
带型
例数 比（%）
例数
pattern of Bands case prop-
1分
百分比（%）例数
2分
百分比（%）例数
3分
百分比（%）例数
4分
百分比（%）例数
5分及以上
百分比（%）
ortion case prop- case prop- case prop- case prop- case prop-
ortion ortion ortion ortion ortion
gp160
gp160(±) gp120 p24
gp160 gp120 p66 gp160 p24 gp160 p24 p17 gp160 p31 p24 gp160 gp120(±) p24 gp160(±) gp41(±) p24 gp160 p66 p51 p24 gp160 gp120 gp160 p17 p31 p17 p17 p24 p24 p17 p66 p51 p24 p55 p51 p24 p31
72 1 1 37 1 1 1 1 1 6 3 1 17 143 8 1 1 1
24.2 0.3 0.3 12.4 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 2.0 1.0 0.3 5.7 2.7 0.3 0.3 0.3
71 0 0 0 0 0 0 0 0 0 3 0 0 6 1 1 0
98.6 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 100.0 0.0 0.0 88.1 75.0 100.0 100.0 0.0
1 0 0 27 0 1 0 0 0 2 0 0 0 13 2 0 0 0
1.4 0.0 0.0 73.0 0.0 100.0 0.0 0.0 0.0 33.3 0.0 0.0 0.0 9.1 25.0 0.0 0.0 0.0
0 1 0 5 0 0 0 1 0 2 0 0 0 4 0 0 0 0
0.0 100.0 0.0 13.5 0.0 0.0 0.0 100.0 0.0 33.3 0.0 0.0 0.0 2.8 0.0 0.0 0.0 0.0
0 0 0 4 1 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0
0.0 0.0 0.0 10.8 100.0 0.0 0.0 0.0 100.0 16.7 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0
0 0 1 1 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0
0.0 0.0 100.0 2.7 0.0 0.0 100.0 0.0 0.0 16.7 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0
48.0 126
p55 p24
合计 Total
1 298
0.3 100
1 199
100.0 66.8
0 46
0.0 15.4
0 13
0.0 4.4
0 7
0.0 2.35
0 4
0.0 1.4
2.3 不确定标本的随访进展结果 对298例不确定样本进行随访，随访时间一到三个月不等，随访检测阴性即判定为真阴性，随访期间带型阳转判定为阳性，将随访带型仍然不确定的首次和随访标本分别进行核酸定量检测，共发现真阳性标本共计28例，占比9.4%。总体来看，不确定标本随着反应强度的增加其阳性率不断提高。不确定标本在不同反应强度下的阳性率比较见表3。
表3:不确定标本在不同反应强度下的阳性率比较
Table 3: positive rate of indeterminate results with different reaction intensity
反应强度(以gp160/gp120/gp41/p24四条带计算)
1分
例
带型 pattern of Bands
数 Case
例数（阳性数） Case(po-sitive
)
gp160
gp160(±) gp120 p24 gp160 gp120 p66 gp160 p24 gp160 p24 p17 gp160 p31 p24 gp160 gp120(±) p24 gp160(±) gp41(±) p24
gp160 p66 p51 p24 gp160 gp120 gp160 p17 p31 p17 p17 p24 p24 p17 p66 p51 p24 p55 p51 p24 p31 p55 p24
合计 Total
1 1 6 3 1 17 143 8 1 1 1 1
0 0 0 3（0） 0 0 126(2) 6（0） 1（0） 1（0） 0 1（0）
0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 2.4 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0
0 0 2（2） 0 0 0 13(1) 2（0） 0 0 0 0
0.0 1（0） 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0
0 0 0 0 0 0 0 0 0
0.0
0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 71.4
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 4（4）
0.0 0.0 100.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 100.0
0.0 1（0） 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0
0 0 0 0 0 0 0 0 0【hiv确诊实验结果不确定】
72 1 1 37 1 1 1【hiv确诊实验结果不确定】
71(2) 0 0 0 0 0 0
2.8 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 阳性率（%） rate
2分 例数（阳性数）Case (positi-ve) 1（0） 0 0 27(6) 0 1（0） 0
0.0 0.0 22.2 0.0 0.0 0.0 阳性率（%）rate
3分 例数（阳性数）Case (posit-ive) 0 0 5(3) 0 0 0
0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 阳性率（%）rate
例数（阳性数）Case (posit-ive) 0 0 0 1(1) 0
0.0 0.0 0.0 75.0 100.0 0.0 阳性率（%）rate 4分
5分及以上 例数（阳性数）Case (posi-tive) 0 0 1(1) 1(1) 0 0 1(1)
0.0 0.0 100.0 100.0 0.0 0.0 100.0 阳性率（%）rate
0.0 1（1） 100.0
60.0 4(3)
100.0 2（2） 100.0 1（1） 100.0 1（1）
7.7 4（0）
298 199（4） 2.0 46（9） 19.6 13（6） 46.2 7（5）
备注：“（）”内为“阳性例数”，此处“阳性”指不确定标本随访后带型进展可以判定为阳性或两次病毒载量检测均为阳性。
从298例标本中带型出现频次来看，p24和gp160出现频次最高。p24条带出现197次，
其中19次随访阳性，占9.6%，gp160出现125次，其中25例随访阳性，占20%，gp120仅出 现9次，且随访100%皆为阳性；从组合带型来分析，gp160 p24和gp160 gp120两种带型是随访阳性率最高的带型。不同带型出现频次和阳性率比较见表4。
hiv确诊实验结果不确定(三)
艾滋病检测结果不确定有哪些原因
艾滋病检测结果不确定有哪些原因
检测结果不确定有如下原因：
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