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【降低病区注射类药物裸装率中的应用】降低病区注射类药物裸装率中的应用(一)
类叶升麻苷的药理作用及药物代谢动力学研究进展
【降低病区注射类药物裸装率中的应用】 【摘要】目的：总结类叶升麻苷药理作用及药动学研究进展，为开发研究提供参考依据。方法：查阅相关的文献报道进行综述。结果：类叶升麻苷药理作用广泛，尤其是抗氧化、抗衰老、增强记忆和神经保护作用等更为突出。其吸收迅速，生物利用度较低，体内分布广泛且存在系统前代谢情况。结论：类叶升麻苷药理活性强、毒副作用小，具有很好的开发前景。 【关键词】类叶升麻苷；药理作用；药动学
【中图分类号】R285【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2015）14-0026-02
Abstract：Objective Summary pharmacodynamics and pharmacokinetics of acteoside to provide reference for further development. Method Search and overview the reported relevant literature. Results Acteoside has extensive and potent biological activities， especially the antioxidant， anti-aging， as well as cytoprotective effects and memory-enhancing. And acteoside is absorbed quickly with low bioavailability， extensive distribution and presystemic metabolism. Conclution Acteoside is a promising drug for further research with potent biological activities and low toxicity.
Keywords：acteoside； pharmacodynamics； pharmacokinetics
类叶升麻苷又名麦角甾苷、毛蕊花糖苷，是一种水溶性较强的苯乙醇苷类化合物，广泛地分布于多种药用植物中，如玄参科的地黄、唇形科的草石蚕、列当科的肉苁蓉、木犀科的连翘、苦苣苔科的红药等双子叶植物。此外，一些中药制剂如灵杞黄斑颗粒、康力宝口服液和消郁舒心胶囊等也含有此化合物，并且在药物疗效中发挥着重要的作用。近年来，由于类叶升麻苷生物活性强、毒副作用小且来源广泛受到了国内外学者的高度重视，研究进展迅速，本文着重就类叶升麻苷这一单体化合物的药理作用机制和药物代谢动力学研究进展进行综述，以期为进一步的开发研究提供参考。
1类叶升麻苷的主要药理作用
11增强记忆及神经保护作用林娟等[1]采用M受体阻断剂东莨菪碱制备小鼠记忆获得性障碍模型，从行为学（跳台法）及大脑皮层和海马中的生化指标（谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、丙二醛（MDA）、乙酰胆碱酯酶（AchE）活性及脑组织蛋白含量）两个方面考察类叶升麻苷的作用，结果表明类叶升麻苷可明显改善东莨菪碱所致的小鼠记忆获得性障碍，表现为：跳台实验时跳台潜伏期显著延长，跳台错误次数显著减少；小鼠脑组织中的GSH-Px、T-SOD、AchE活性和脑组织蛋白含量明显升高，MDA含量降低。作用机制可能与减少自由基损伤、产生抗氧化作用及改善中枢胆碱能神经系统（如抑制AchE活性和激动M受体）有关。白鹏等[2]研究证实，类叶升麻苷对冈田酸诱导的阿尔茨海默病（AD）细胞模型具有保护作用[2]，[JP2]也可明显改善MPTP 诱导的C57小鼠的行为学表现，增加脑内多巴胺的含量，增加黑质纹状体α-突触核蛋白水平，对多巴胺能神经元损伤具有保护作用[3]。这些研究表明类叶升麻苷在预防和治疗AD和帕金森综合征（PD）等疾病方面具有潜在的发展前景。[JP]
12抗氧化和抗衰老作用类叶升麻苷对D-半乳糖制备的衰老小鼠及H2O2诱导的PC12细胞氧化损伤具有抗氧化和保护作用[4-5]，杨建华等[6]通过研究肉苁蓉植物中六种苯乙醇苷类化合物抗氧化活性的构效关系发现，苯乙醇羟基是抗氧化活性的重要官能团，且酚羟基的数目及位置对抗氧化活性有着重要的影响。因此类叶升麻苷抗氧化作用的机制可能为类叶升麻苷分子中含有 4个酚羟基，能与自由基发生反应，同时降低组织中有害代谢物质MDA的含量，提高GSH-Px和T-SOD的活性，从而清除自由基，避免其过量堆积，产生机体抗衰老和抗氧化作用。此外，研究管花肉苁蓉类叶升麻苷对衰老小鼠端粒酶活性的影响，结果表明其可抑制端粒酶的活性，从而延缓衰老[7]。
13免疫调节作用类叶升麻苷对免疫系统具有免疫调控活性。类叶升麻苷可以促进淋巴细胞增殖反应、腹腔巨噬细胞吞噬功能及增加外周血中IL-2的含量，提高机体非特异性细胞免疫，从而增强免疫功能[7]。唐永康等[8]从大粒车前子中提取的类叶升麻苷可促进小鼠骨髓来源树突状细胞的增殖，增强树突状细胞的活力，与细胞因子产生明显的协同作用发挥免疫调节活性。
14抗肿瘤作用类叶升麻苷以剂量依赖性的方式对裸鼠人大肠癌移植瘤的生长具有明显的抑制作用，对免疫组织化学法检测结果进行分析，发现随着类叶升麻苷浓度的增加，瘤体组织中促进性凋亡基因HIPK2、P53及Bax的表达显著增加，而抑制性凋亡基因Bcl-2的表达明显降低。这表明类叶升麻苷发挥抗肿瘤作用可能是通过调节裸鼠体内相关凋亡基因的蛋白表达从而促进大肠癌细胞凋亡来完成[9]。另有文献报道，类叶升麻苷还对肿瘤细胞的转移具有抑制作用，可有效抑制肺中B16黑色素瘤的浸润性转移[10]。
15其他作用除了以上作用，赵军等[11]发现类叶升麻苷可以使升高的谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性降低，对大鼠原代肝细胞免疫性肝损伤具有保护作用。马晶晶等[12]研究表明类叶升麻苷对腹腔注射氧化可的松建立的小鼠肾阳虚模型具有补肾壮阳的作用。此外，类叶升麻苷还具有抗炎、抗菌、强心、抗辐射及防治骨质疏松等多种药理作用[13-17]。 2类叶升麻苷的药物代谢动力学研究进展
目前有关类叶升麻苷的药物代谢动力学方面的研究报道较少，更是缺乏临床数据，现有的研究结果主要来源于体外和动物试验，现就近年来类叶升麻苷在药物代谢动力学方面的研究进展加以概述。
21生物样品中类叶升麻苷的测定方法目前报道的生物样品中类叶升麻苷的测定方法主要为HPLC-UV和HPLC-MS/MS等。吴培培等[18]采用反相HPLC测定大鼠血浆中类叶升麻苷的浓度，以香豆酸为内标，血浆样品经乙酸乙酯二次提取处理进样分析，流动相为甲醇-乙腈-1%甲酸溶液（162∶108∶73，V/V），恒速洗脱，流速为12mL/min，检测波长为330nm，结果类叶升麻苷在0125～20mg/L浓度范围内线性良好，最低检测限（信噪比S/N≥3）和最低定量限（信噪比S/N≥10）分别为005和0125mg/L，提取回收率约为70%，准确度和精密度等都符合生物样品测定要求，成功地应用于类叶升麻苷在大鼠体内的药物代谢动力学研究。Li Y等[19]采用LC-MS/MS法测定大鼠血浆中类叶升麻苷的药物浓度，血浆样品用含内标（染料木素）的乙腈沉淀后取上清液直接进样，以水（05%甲酸）-乙腈（05%甲酸）为流动相，经色谱柱梯度洗脱分离后采用多反应监测（MRM）扫描方式进行检测，质谱条件为负离子方式检测，类叶升麻苷的离子反应为m/z6233→1608（DP电压：150eV；CE电压：50eV）。结果为该方法专属性强、灵敏度高，最低定量限为02ng/ml，在02～200ng/ml范围内线性关系良好。随着对血浆样品中药物浓度测定要求的提高，具有高灵敏度、高选择性及快速分离特点的LC-MS/MS方法在药物代谢动力学方面的研究愈加广泛。
22吸收在Caco-2细胞模型研究中，发现类叶升麻苷吸收迅速，在15～30min达到最大累积量，且在10～100μM浓度范围内，吸收与浓度呈相关性，没有出现饱和现象，但其吸收百分率较低仅为01%，暗示生物利用度较低[20]。孙秀漫等[21]运用肠外翻囊法研究大鼠对枇杷叶紫珠中类叶升麻苷的肠吸收机制，结果表明类叶升麻苷在各肠段（十二指肠、回肠、空肠）均有吸收，无肠段差异性，药物吸收符合一级动力学过程，吸收机制可能为被动扩散，但其吸收程度也不理想，推测类叶升麻苷生物利用度低的原因可能为药物极性大导致膜通透性低以及系统前广泛代谢等。
23分布甘萍等[22]研究了大鼠灌胃给予300mg/kg的类叶升麻苷后各组织中的分布情况，类叶升麻苷可快速分布到各组织中，各组织达峰时间不一致，最早为008h（卵巢），最迟为3h（肾脏），且给药3h之后组织中药物浓度相对较低。组织中肠、脾脏、肺、肌肉中分布较高，其他组织分布较少，这可能与药物经肠道吸收和血流分配有关。在全脑和睾丸中检测到一定含量的类叶升麻苷，说明药物可在一定程度上透过血脑屏障和血睾屏障。文献报道大鼠静脉注射10mg/kg的类叶升麻苷15min后，测定其在大脑不同区域（脑干、大脑皮层、小脑、海马区、纹状体及其它）中的浓度，结果表明大脑各部位都有一定量的药物分布且无显著性差异[23]，这些结果为类叶升麻苷能够用于预防和治疗AD和PD等神经系统疾病提供了一定的理论基础。
24代谢Qi M等[24]采用UPLC/ESI-QTOF-MS，在灌胃给予类叶升麻苷的大鼠尿液中检测到35种代谢产物，其中19种为其II相甲基化、葡萄糖醛酸化代谢产物，其余16种则为其可能被肠道微生物降解而产生的咖啡酸（CA）和羟基酪醇（HT）的I相和II相代谢产物，并在此基础上提出了其在体内可能的代谢途径。研究表明类叶升麻苷在体内极易水解，且大部分被降解生成代谢产物，因此这可能是其生物利用度低的主要原因。CA和HT作为类叶升麻苷的降解产物在抗氧化和神经保护方面也具有显著的活性，类叶升麻苷及其在胃肠道或肝脏中经过一系列代谢生成的活性代谢产物或中间产物，共同发挥其良好的药理作用。
3结语
综上所述，类叶升麻苷具有显著的生物活性，药理作用广泛且毒性小、安全性好，显示出潜在的开发价值，很有希望研发成一种用于治疗AD、PD和抗肿瘤等的新型药物。近些年，关于类叶升麻苷的药物代谢动力学研究取得了一些进展，但不够系统和全面，如类叶升麻苷的排泄途径、对药物代谢酶的影响以及药物间的相互作用等都需要进行研究和完善。同时，其口服给药生物利用度低，有广泛的系统前代谢，给药后体内过程复杂，能否满足体内疗效的物质基础需要通过药代动力学和药效动力学结合（PK-PD）模型以及生理药物代谢动力学（PBPK）模型进行进一步的研究。中药单体和有效成分以其结构明确、毒副作用较少成为药物研发的重点之一，运用科学理论与实践及相应完善的指导原则，筛选出高效的候选化合物，以期使活性较好的化合物安全、有效地应用于临床。
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（收稿日期：20150505）【降低病区注射类药物裸装率中的应用】
降低病区注射类药物裸装率中的应用(二)
RNA干扰在口腔癌基因治疗上的研究进展
摘要：口腔癌是一种常见的世界性的粘膜上皮性的恶性肿瘤，其主要的发生机制可能是基因的突变造成了细胞中原癌基因激活和抑癌基因失活，从而导致细胞内信号传导和细胞周期紊乱，细胞凋亡受到抑制，出现细胞的异常增殖。RNA干扰（RNA interference，RNAi）是近年来发现的一种新的诱导基因沉默的基因治疗技术。本文将就RNA干扰技术及其在口腔癌基因治疗的研究及应用作一综述。 关键词：RNA干扰 口腔癌 基因治疗
【中图分类号】R-0 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2014）04-0039-02
口腔癌是最常见的恶性肿瘤之一，发病率居全身恶性肿瘤第六位，局部复发率高，预后较差，超过半数的晚期口腔癌患者生存不足1年[1]。口腔癌发生的根本原因是基因水平的变异。基因治疗（gene therapy）是运用分子生物学的技术，通过基因变换的方法达到治疗人类疾病的目的，包括转染新遗传物质和对现存遗传物质进行加工，从而使疾病在基因水平得以治疗，是一种分子生物学和现代医学相结合的新兴技术。基因治疗的疾病包括心血管疾病、感染性疾病、遗传病、恶性肿瘤。近年来RNAi技术的不断成熟，使其在医学领域迅速发展，尤其在癌症的治疗方面，已经成为基因治疗领域的研究热点，并且部分学者已经取得了重大的突破。因此，基因治疗在口腔癌的治疗和预后判断方面占了非常重要的地位。
RNAi是1998年由Fire[2]等在新杆状线虫中首次发现的一种序列特异性的基因转导后的沉默机制（post-transcriptional gene silencing，PTGS）。它通过一段与靶基因序列同源的双链DNA（double stranded DNA，dsDNA）裂解所产生的小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）导致同源mRNA降解从而使目的基因失表达。
1 RNAi的调控机制
在不同生物物种中，RNAi作用的机制各不相同，大致可分为大于30nt（核苷酸）的非特异效应长的双链RNA和21～23nt的特异效应的短双链RNA [3，4]。肿瘤基因治疗主要是在转录、转录后、翻译等水平实现RNAi的特异性调控效应。
1.1 转录水平的调控主要通过siRNA与互补DNA直接结合发挥作用，激发同源的DNA甲基化加强，限制目的基因转录，关闭其表达，进而导致基因的沉默。但是甲基化如果出现在启动子区域，转录就不能进行，甲基化出现在编码区，则转录继续进行，但在转录后水平上实现基因沉默。
1.2 转录后水平的调控可分起始阶段和效应阶段[5]。起始阶段主要包括dsRNA的导人和切割。导入包括外源性导入或由转基因、转座子、病毒感染等多种方式导入dsRNA；切割则是指dsRNA在细胞内切酶（dicer）的作用下切割成2l～23 nt长度的siRNA[6]。效应阶段是指在siRNA反义链的指导下，双链siRNA与1个RNA酶结合形成沉默复合体（RNA induced si1encing complex，RISC）[7]，然后siRNA双链解螺旋，正义链释放，激活RISC，识别互补的靶mRNA，siRNA的反义链与复合体换位，并在距siRNA 3’末端的12nt处切割目的mRNA，使其丧失转录信息。
1.3 翻译水平上的调控是抑止相应mRNA的翻译，使蛋白质的表达受阻，其中小时序RNA（small temporal RNA，stRNA）起重要作用（长度约70nt的RNA形成的茎环样前体），经dicer酶作用后形成长约2l～23 nt的dsRNA，通过RISC结合在相应mRNA的3’末端非翻译区上，进而阻断mRNA的翻译。
2 RNAi技术在口腔癌中的实验研究
2.1 下调凋亡抑制基因或癌基因的表达。端粒酶逆转录酶（telomerase reverse transcriptase protein，hTERT）基因较高的表达于人口腔癌中，其作用机制是：hTERT高表达后合成端粒重复序列，以弥补细胞分裂过程中的端粒短缩，促进癌细胞分化、抑制凋亡发生，最终导致癌细胞永生化。刘希强、黄鸿章[8]等利用RNAi技术，构建了慢病毒重组hTERT质粒载体并导入口腔癌细胞株Tca8113及裸鼠皮下移植瘤内，发现siRNA诱导的RNAi明显抑制hTERT基因的表达，从而抑制了Tca8113细胞的增殖。S期激酶相关蛋白（S-phase kinase associated protein2，Skp2）基因是潜在的原癌基因，其表达产物Skp2蛋白不但是泛素化的必要条件，也参与P27蛋白的降解。在口腔鳞状细胞癌中P27蛋白低表达而Skp2蛋白过度表达。日本学者Kudo Y[9]通过RNAi沉默Skp2基因，发现转染的口腔癌细胞中Skp2蛋白表达减少而P27蛋白表达增加，裸鼠体内同样抑制了肿瘤的增殖，为口腔癌的基因治疗提供了可能的靶基因。
2.2 上调抑癌基因的表达。抑癌基因p27的异常与肿瘤的发生密切相关，在大部分的癌细胞中，都可以检测到p27基因表达下调。角蛋白（Creek Keratin Shampoo，CKs1）的表达与p27的下调呈反相关。Kitajimat[10]等用特异的siRNA对口腔鳞状细胞癌（舌癌和牙龈癌）细胞中的CKsl进行干扰，成功抑制了CKs1基因的表达并诱导了p27在细胞中的积累，从而抑制了口腔鳞状细胞癌细胞的生长。
2.3 抑制与信号转导相关的酶基因的表达。某些癌基因的激活会造成正常信号通路的紊乱，而影响细胞正常的繁殖凋亡，引起肿瘤。siRNA可以高效、特异地封闭这些基因的转录产物受体，却不影响其他基因的表达。梁新华[11]等通过RNAi引起尿激酶纤溶酶原激活物受体的低表达，成功抑制口腔癌细胞的增殖。
2.4 抑制耐药基因的表达。恶性肿瘤化疗失败的主要原因是耐药性，耐药基因的表达很大程度地影响化疗药物的效果。Survivin是一种凋亡抑制基因，特异性地表达于肿瘤细胞，通过抑制终末效应蛋白caspase-3和7发挥其抑制肿瘤细胞凋亡的作用。许建辉、黄洪章[12]等人用特异性siRNA干扰口腔鳞状细胞癌中Survivin的表达，抑制Tca8113细胞增殖和增加caspase-3活性，促进其凋亡，同时也提高了肿瘤细胞对放射线及化疗药物的敏感性。Bcl-2基因是另一种重要的凋亡抑制基因，其编码蛋白Bcl-2在肿瘤细胞中高表达，增强了癌细胞的存活力，拮抗化疗药物诱导肿瘤细胞发生凋亡的作用，与肿瘤耐药性的形成密切相关。Yin ZH等[13]用靶向BCL-2的shRNA的载体转染鼻咽癌细胞株CNE1，抑制BCL-2蛋白的表达，影响细胞增殖的效果不明显，但癌细胞对顺铂的敏感性增强。此外，Souichi Yanamoto[16]也通过沉默的p53R2基因提高了口腔癌细胞对五氟脲嘧啶的敏感性。 2.5 抗血管生成基因治疗。口腔癌也是血管依赖性的肿瘤，肿瘤新生血管为其生长提供养分的输送及代谢物的输出。但是肿瘤血管通常缺乏平滑肌，基底膜存在不规则的漏洞，为肿瘤的转移提供可能。抗血管生成得基因治疗主要通过抑制肿瘤血管的生成，来抑制肿瘤的生长和转移。目前抗血管生成基因主要包括：针对VEGF及其受体（VEGFR）的基因、血管抑素（vasostatin）基因、内皮抑素（endostatin）基因。其中又以VEGF诱导肿瘤血管生成的作用最强、特异性最高，成为抗血管生成基因治疗的首选[14]。Shen[15]等针对VEGF各亚型的siRNA构建成RNAi表达载体，均可特异性地抑制各亚型VEGF的表达，有效地抑制了肿瘤细胞的生长。u-PAR主要参与细胞分化、血管形成、细胞迁移、细胞外基质降解和组织重建等过程。在高度恶性的口腔癌细胞OSC-19中，u-PAR是其侵袭和转移所必需的。Nozaki[16]应用u-PAR特异的siRNA转染该细胞，沉默u-PAR基因，实现抑制了OSC-19细胞的侵袭和转移。另外，HIF-1a过表达与肿瘤侵袭性的强弱密切相关，Zhang等[17]应用siRNA的方法敲除舌癌细胞株SCC-4和SCC-9的HIF-1a基因，成功抑制了SCC-4和SCC-9的增殖并且诱导了该细胞的凋亡，为用干扰HIF-1a治疗人舌鳞状细胞癌提供了理论及实验依据。
3 RNAi技术在口腔癌中的应用
目前，应用于口腔癌基因治疗的药物只有重组腺病毒介导的p53和西妥昔单抗。美国研究的重组腺病毒p53（Ad-p53）I～Ⅲ期临床试验在多个临床实验中心的近千人中进行，主要通过瘤内多点注射，少量通过静脉给药，并与放化疗联合应用。结果表明：Ad-p53瘤内注射治疗复发性头颈部鳞癌安全、有效，只有发热和注射部位疼痛是最常见的不良反应[18]。同期研究，在手术切除的晚期口腔癌患者术中给予Ad-p53治疗，术后联合放化疗，证实了手术时利用Ad-p53抑制可能残存肿瘤细胞，以及联合放化疗治疗的可行性、安全性和有效性[18]。2003年FDA认定Ad-p53可延长复发性不可手术切除的头颈部鳞状细胞癌患者生存时间，推迟疾病进展时间。
西妥昔单抗作为EGFR的单克隆抗体能够与EGFR的内源性EGF-TGF-Ⅱ竞争性地与EGFR胞外配体区结合，降低EGFR自身磷酸化，阻断下游信号转导通路，抑制生长因子激活细胞有丝分裂信号的下传，抑制肿瘤细胞增殖[19]。目前，多采用全身给药（静脉滴注）的方法治疗头颈肿瘤患者的西妥昔单抗，且多与放、化疗等常规疗法联合应用。Pfister等[20，21]对20余例临床晚期患者（I和Ⅳ期）随机分为对照组和治疗组，其中对照组采用放疗（1.8Gy/d、共70Gy）和通过静脉给药顺铂（100 mg/m2），而治疗组为放疗（1.8Gy/d、共70Gy）加静脉给药西妥昔单抗（400 mg/m2）进行I期和Ⅱ期临床试验，取得了良好的治疗效果；随后的Ⅲ期试验证实，西妥昔单抗与放疗联合可显著提高患者2到3年的生存率。对于复发或转移且对顺铂类药物产生耐药性的头颈部鳞癌患者，应用西妥昔单抗后，部分患者可恢复或提高对顺铂类药物的敏感性[22]。
4 口腔癌的其他基因治疗方法
4.1 免疫基因治疗。免疫基因治疗是指结合机体自身的免疫机制将特定的外源基因转入肿瘤细胞中，并使其高水平表达相关的细胞因子或MHC抗原，从而激化特异性的抗肿瘤免疫作用。使用遗传工程技术处理肿瘤细胞，使其携带特定细胞因子基因，注射至机体后可以在肿瘤位点持续稳定的表达并释放所携带的细胞因子。注射活的携带特定细胞因子基因的肿瘤细胞，经过增殖会产生更多的抗原，提高细胞因子浓度，进而达到生物学和药理学所需的阈值，引起抗肿瘤的特异性免疫反应。随着免疫反应的进行，肿瘤细胞被杀死，从而关闭了初始的触发作用。目前研究常用的细胞因子包括：提高IL-2、INF-γ、TNF-α等从而提高机体免疫系统对肿瘤细胞的识别作用，增强组织相容性抗原等位基因表达，诱导机体的免疫反应。
4.2 自杀基因治疗。针对肿瘤治疗的自杀基因治疗方法，是通过将表达外源性酶活性的基因导入肿瘤细胞，随后在体内稳定表达的活性酶可以将肿瘤细胞周围的无毒性的药物（称为药物前体）催化成为仅对肿瘤细胞具有细胞毒性的药物，从而达到杀死肿瘤细胞的目的。由于在实际应用中，通常采用病毒载体，因此又被称为病毒介导的酶解药物前体疗法（virus directed enzyme prodrug therapy，VDEPT）。自杀基因治疗系统有数十种，其中在癌症研究中运用最多的是胸腺嘧啶激酶基因/丙氧鸟苷系统（TK/GCV）和胞苷脱氨酶/5-氟胞嘧啶系统（CD/5-FC）。
5 口腔癌基因治疗面临的问题及发展趋势
5.1 多基因异常发生机制和单基因治疗方案的矛盾：口腔癌的发生发展是一个极其复杂的过程，是体内外多因素的多基因异常。而目前肿瘤基因治疗研究中，绝大多数都采用单基因方案，而进入临床试验研究的多基因联合方案还未见报道。因此有必要发展多基因联合方案的研究和应用。
5.2 全身性疾病和局部给药方式的矛盾：如以Ad-p53基因转移治疗口腔癌的方案中，常采用直接将腺病毒注射到肿瘤局部[17]。若静脉注射，病毒颗粒将很快被清除，真正能够到达肿瘤组织的很少，难以达到治疗效果，且增加了副作用。而局部用药只能对局部的病变起作用，药物没有达到的浸润病灶及转移淋巴结无效。因此推荐动脉给药途径，提高基因导入的靶向性和转染效率。
5.3 联合应用：对晚期肿瘤患者，放疗、化疗、热疗以及基因治疗的单一应用其疗效尚不能满足治疗需要，因此推荐对晚期口腔癌患者进行传统疗法与基因治疗的联合应用，从而达到控制肿瘤发展，延长患者带瘤生存时间、提高生存质量的目的。
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