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什么能杀灭乙型溶血性链球菌(一)
一起乙型溶血性链球菌引起的食物中毒结果分析
一起乙型溶血性链球菌引起的食物中毒结果分析
【摘要】 目的 一起由乙型溶血性链球菌引起的食物中毒事件,依据国标检验方法，结合新的检验试剂与方法，快速为食物中毒事件的处理提供检验依据。方法 依据GB/T47892003(食品卫生微生物学检验)和GB149381994(食品中毒诊断标准及技术处理总则)。结果 29人中有5人的大便中检出乙型溶血性链球菌, 1名厨师的大便中检出乙型溶血性链球菌,经流行病调查及实验室检测证实这是一起由乙型溶血型链球菌引起的食物中毒。结论 溶血性链球菌在自然界中分布较广，存在于水、空气、尘埃、粪便及健康人和动物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接触、空气飞沫传播或通过皮肤、黏膜伤口感染，被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也会对人类进行感染。上呼吸道感染患者、人畜化脓性感染部位常成为食品污染的污染源。
【关键词】乙型溶血性链球菌;食物中毒
延边州卫生局卫生监督所于2010年4月7日上午9:22接到延吉市疾病预防控制中心电话报告：住在延边民航翔宇大酒店，参加全国大学生女排联赛的运动员，20多人出现恶心、呕吐、腹痛、腹泻等可疑食物中毒症状，患者正在延边大学福祉医院、延吉欧亚医院接受治疗。接到上述的情况报告后，延边州卫生监督所、延边州疾病预防控制中心立即组织人员赶赴延边大学福祉医院、延吉欧亚医院和延边民航翔宇大酒店餐厅进行流行病学、现场卫生学调查，并进行了现场采样。
1 中毒经过
2010年4月6日，17时30分到18时，参加全国大学生女排联赛的运动员122人，在延边民航翔宇大酒店餐厅就餐后，于6日21时开始，部分运动员及陪同人员出现恶心、呕吐、腹痛、腹泻等症状，到7日上午9:30时止，共有29人出现中毒症状，截止7日19时30分，共有29名中毒患者到延边大学福祉医院和延吉欧亚医院就诊。经临床对症治疗，到4月8日12时，中毒的人员症状均得到缓解，情况稳定。
2 临床表现及流行病学调查结果
在29名中毒患者中，潜伏期最短3.5 h，一般潜伏期6.5 h，发病患者29人中出现恶心29人、呕吐24人、腹痛20人、腹泻27人、头晕12人、头痛9人、发热4人、关节酸痛1人；发病年龄19～51岁，平均年龄21岁；女28名，男1名；中毒患者均于4月6日晚在延边民航翔宇大酒店餐厅食用自助餐。
3 现场卫生学调查
该餐厅食品卫生许可证和从业人员健康证明均在有效期内。现场检查凉菜间，发现直接入口食品与待加工食品的加工过程有交叉污染，冰箱内存放的直接入口食品未加盖相互叠放；应当冷藏的沙拉酱没有冷藏存放。从业人员便后洗手消毒习惯不良。凉菜间厨师吕某4月6日曾有过轻度腹泻，早晨1次，下午3
什么能杀灭乙型溶血性链球菌(二)
溶血性链球菌检验
【GB/T 4789.11—1994】
食品卫生微生物学检验 溶血性链球菌检验
1 主题内容与适用范围
本标准规定了食品中溶血性链球菌的检验方法。
本标准适用于食品和食物中毒样品中溶血性链球菌的检验。
2 引用标准【什么能杀灭乙型溶血性链球菌】
GB 4789.28 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂 3 设备和材料
3.1 温箱：36±1℃。
3.2 水浴：36±1℃。
3.3 显微镜。
3.4 离心机。
3.5 试管架。
3.6 灭菌平皿。
3.7 灭菌小试管。
3.8 载玻片。
3.9 灭菌吸管：1mL、10mL。
3.10 灭菌镊子。
3.11 均质器。
3.12 酒精灯。
3.13 接种环。
4 培养基和试剂
4.1 葡萄糖肉浸液肉汤：按GB 4789.28中4.1规定，在肉浸液肉汤内加入1%葡萄糖。
4.2 肉浸液肉汤：按GB 4789.28中4.1规定。
4.3 匹克氏肉汤：按GB 4789.28中4.62规定。
4.4 血琼脂平板：按GB 4789.28中4.6规定。
4.5 人血浆。
4.6 0.25%氯化钙。
4.7 灭菌生理盐水。
4.8 杆菌肽药敏纸片(含0.04单位)。
5 检验程序
（图略）
6 操作步骤
6.1 样品处理
称取25g固体检样；称取25mL液体检样，加入225mL灭菌生理盐水，研成匀浆制成混悬液。
6.2 一般培养
将上述混悬液吸取5mL，接种于50mL葡萄糖肉浸液肉汤；或直接划线接种
于血平板，如检样污染严重，可同时按上述量接种匹克氏肉汤，经36±1℃培养24h，接种血平板，置36±1℃培养24h，挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯，然后观察溶血情况及革兰氏染色，并进行链激酶试验及杆菌肽敏感试验。
6.3 形态与染色
本菌呈球形或卵圆形，直径0.5～1μm，链状排列，链长短不一，短者4～8个细胞组成，长者20～30个，链的长短常与细菌的种类及生长环境有关；液体培养中易呈长链；在固体培养基中常呈短链，不形成芽孢，无鞭毛，不能运动。
6.4 培养特性
该菌营养要求较高，在普通培养基上生长不良，在加有血液、血清培养基中生长较好。溶血性链球菌在血清肉汤中生长时管底呈絮状或颗粒状沉淀。血平板上菌落为灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直径约0.5～0.75mm，为圆形突起的细小菌落，乙型溶血链球菌周围有2～4mm界限分明、无色透明的溶血圈。
6.5 链激酶试验
致病性乙型溶血性链球菌能产生链激酶(即溶纤维蛋白酶)，此酶能激活正常人体血液中的血浆蛋白酶原，使成血浆蛋白酶，而后溶解纤维蛋白。 吸取草酸钾血浆0.2mL，加0.8mL灭菌生理盐水，混匀，再加入18～
24h36±1℃培养的链球菌培养物0.5mL及0.25%氯化钙0.25mL(如氯化钙已潮解，可适当加大至0.3%～0.35%)，振荡摇匀，置于36±1℃水浴中10min，血浆混合物自行凝固(凝固程度至试管倒置，内容物不流动)。然后观察凝块重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h后不溶解即为阴性。
草酸钾人血浆配制：草酸钾0.01g放入灭菌小试管中，再加入5mL人血，混匀，经离心沉淀，吸取上清液即为草酸钾人血浆。
6.6 杆菌肤敏感试验
挑取乙型溶血性链球菌液，涂布于血平板上，用灭菌镊子夹取每片含有0.04单位的杆菌肽纸片，放于上述平板上，于36±1℃培养18～24h，如有抑菌带出现即为阳性。同时用已知阳性菌株作为对照。
什么能杀灭乙型溶血性链球菌(三)
微生物复习
微生物：个体微小，结构简单，用肉眼不能直接看见，必须用显微镜放大后才能看到的微小生物的总称。
微生物学：用以研究微生物的分布、形态结构、生命活动（包括生理代谢、生长繁殖）、遗传与变异、在自然界的分布与环境相互作用以及控制它们的一门科学。
医学微生物学：主要研究与人类医学有关的病原微生物的生物学性状、对人体感染和致病的机理、特异性诊断方法以及预防和治疗感染性疾病的措施，以控制甚至消灭此类疾病为目的的一门科学 细菌 L 型又称细胞壁缺陷型：是细胞壁中的肽聚糖受到理化或生物因素的破坏或抑制，致使细胞壁发生缺陷而在高渗环境下仍能存活生长的一类细菌。革兰阳性菌L型称原生质体，革兰阴性菌L型称原生质球。某些细菌 L 型仍可有致病力，在临床症状明显而常规的培养阴性时应考虑之。真菌:是一大类具有细胞壁和典型细胞核,不含叶绿体,不分根茎叶的真核细胞型微生物.
病毒：是一群体积微小、结构简单、只有一种核酸(DNA或RNA)，易感活细胞内寄生、以复制方式增殖的非细胞型微生物 。
逆转录病毒：是一组含逆转录酶，具有包膜的RNA病毒。可引起人和动物白血病和AIDS等疾病。
内基小体:在易感动物和大的中枢神经细胞中增值时,可在胞质内形成嗜酸性、圆形或椭圆形的包涵体.
耐药性变异：对某种抗菌药物敏感的细菌，可以逐渐对该药物产生抵抗性。败血症：病原菌侵入血流并在其中大量繁殖，造成机体严重损害，出现全身中毒症状。
菌血症：细菌侵入血流，但不在血中生长繁殖，出现轻微中毒症状。
脓毒血症:化脓性细菌引起宿主的败血症的同时，在许多脏器中引起化脓性病灶
毒血症：病原体被限制在局部病灶，所产毒素进入血流而引起全身症状
病毒体：完整的具有感染性的病毒颗粒称为病毒体，存在于细胞外。
前噬菌体：整合到细菌染色体上的噬菌体基因组。抗原转换：流感病毒HA、NA发生质的改变形成新的亚型的变异。 抗原漂移：指甲型流感病毒的抗原性仅发生亚型内部较小的量变，而形成新的亚种。
温和噬菌体：有些噬菌体侵袭细菌后，不能复制增值，而将其基因整合于细菌的DNA上，成为细菌DNA的一部分，并随细菌分裂分布于两个子代细菌中，这种噬菌体称为温和噬菌体。
神经氨酸酶：为流感病毒包膜表面蘑菇状抗原，它具有酶活性和抗原性，抗-NA起中和病毒作用。 血凝素：流感病毒包膜表面柱状抗原，具有免疫原性，酶活性，抗原性。
热原质:即菌体中的脂多糖,由革兰阴性菌产生,注入人体和动物体内能引起发热反应.
质粒: 存在于细菌胞质中的染色体外的遗传物质，为双股环状 DNA，决定细菌的某些遗传性状，如有无菌毛、细菌素、毒素和耐药性
荚膜:由细菌所分泌的包绕在菌体外的一层粘液性物质，具有抗吞噬及粘附作用，与细菌的致病性有关。
鞭毛：由菌体伸出的细长呈波状弯曲的丝状物，是细菌运动器官。
菌落:单个细菌经一定时间培养后形成的一个肉眼可见的细菌集团
.菌毛：某些菌体表面存在的纤细短直的丝状物，分为普通菌毛和性菌毛。普通菌毛是细菌的粘附器官，与细菌的致病性有关。性菌毛由F质粒编码，参与遗传物质的传递。
芽胞：某些细菌在一定环境条件下，胞质脱水浓缩，在菌体内部形成的圆形小体，可用于细菌的鉴别，因其抵抗力较一般细菌繁殖体强，是判断灭菌效果的指标。
支原体: 缺乏细胞壁，呈高度多形性，能通过滤菌器，能够在无生命培养基中生长繁殖的最小原核细胞型微生物。 培养基:人工配置的供给细菌生长繁殖的营养基质.
汹涌发酵:产气荚膜梭菌在牛乳培养基中生长时发酵乳糖产酸,使酪蛋白凝固,同时产生大量气体将凝固的酪蛋白冲碎,并将封闭的凡士林冲至试管口的现象. 顿挫感染：当病毒进入宿主细胞后，因细胞缺乏病毒所需的酶和能量，可以表达病毒的某些成分，但不能复制出完整的病毒体或具有感染性的病毒。 异染颗粒：胞质颗 粒的一种，多由 RNA 和多偏磷酸盐组成，嗜碱性强，用亚甲兰染色着色较深。可用于细菌的鉴别。（白喉杆菌、鼠疫杆菌）。侵袭力：细菌突破机体的防御机能，在一定部位生长繁殖的能力。
外膜蛋白（OMP）：革兰氏阴性菌细胞壁外膜脂质双层中镶嵌的蛋白质，参与物质扩散或为噬菌体、性菌毛或细菌素的受体。
消毒：杀死物体上病原微生物的方法，并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物。灭菌：杀死物体上所有微生物的方法，包括病原微生物、非病原微生物及芽胞。无菌：不含活菌。
抑菌：抑止体内或体外细菌的生长繁殖。常用抑菌剂为抗生素。
防腐：阻止或抑制细菌生长繁殖的方法，细菌一般不死亡.
无菌操作：防止细菌进入人体或其它物品的操作技术。
噬菌体: 是感染细菌、真菌、放线菌、螺旋体等微生物的病毒。
抗生素：生物在生命活动过程中产生的极微量即能选择性抑制或影响他种生物机能的一类化学物质。
菌群失调:多应用于广谱抗生素引起正常菌群间比例失调和改变,引起菌群失调症或菌群交替症,
灭活：病毒因理化因素的作用，失去感染性但仍保持其他特性。
质粒：细菌染色体外的遗传物质，是环状闭合的双链DNA。带有遗传性息，能自行复制，随细菌分裂转移到子代细胞，并非细菌生长所必需。 转座子：（转位因子）是存在于细菌染色体或质粒DNA分子上的一段特异性核苷酸序列片段，它能在DNA分子中移动，不断改变它们在基因组的位置，能从一个基因组转移到另一个基因组中。 整合子：是一种基因单位， 具有独特的结构可捕获和整合外源性基因，使之转变成为功能性基因的表达单位。
转导：由噬菌体介导，将供菌的DNA片段转入受菌，使受菌获得供菌的部分遗传性状。转化：供体菌裂解游离的DNA片段被受体菌直接摄取，使受体菌获得新的性状。
接合：细菌通过性菌毛相互连接沟通，将遗传物质（主要是质粒DNA）从供体菌转移给受体菌。
溶原性转换：当噬菌体感染细菌时，宿主菌染色体中获得了噬菌体的DNA片段，使其成为溶原状态时而致细菌获得新的性状。抗O试验：抗链球菌溶素O试验简称抗O试验，常用于风湿热的辅助诊断。
包涵体：某些受病毒感染的细胞内，用普通光学显微镜可看到有与正常细胞结构和着色不同的圆形或椭圆形的斑快。意义：病毒感染的诊断依据。干扰素:干扰素——获得性非特异性免疫。由病毒或其他干扰素诱生剂刺激人或动物细胞所产生的一类具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的糖蛋白。 细胞病变效应(CPE)：溶细胞型病毒感染细胞后，可出现细胞团缩、裂解或肿大、数个细胞融合成多核巨细胞或聚集成葡萄串状、脱落或死亡等。核衣壳:核酸与衣壳共称为核衣壳，是病毒的基本结构。 朊粒:正常宿主细胞基因编码的、构象异常的朊蛋白。是一种蛋白质传染因子. 院内感染:又称院内感染或医院获得性感染，主要指患者在医院内发生的感染，广义上指医院内各类人群所获得的感染。感染发生的地点在医院内。以内源性感染为主。感染对象为医院内各类人群。病原菌多为耐药菌株。
微生物分哪3类，有什么区别？并举例说明。 1）.非细胞型微生物。无细胞结构，无产生能量的酶系统，含一种核酸(DNA或RNA); 只能在活细胞内增殖; 是最小一类微生物.病毒属此类2)原核细
胞型微生物。核呈环状裸DNA团块结构，无核膜、核仁。细胞器很不完善,只有核糖体。DNA和RNA同时存在。原核细胞型微生物的种类包括细菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体和放线菌等。3）.真核细胞型微生物。细胞核分化程度高，有核膜和核仁。细胞器完整。真菌属此类。
细菌的基本结构和特殊结构有哪些？特殊结构各有何作用？细菌的基本结构：细胞壁、 细胞膜 、细胞质、核质。细菌的特殊结构：荚膜、鞭毛、菌毛、芽胞。荚膜：①抗吞噬；②抗干燥；③抗有害物质损伤。鞭毛：①细菌的运动器官；②化学趋向性；③与某些细菌的致病性相关；④数量、分布可用以鉴别细菌；⑤鞭毛抗原有很强的免疫原性。菌毛：①细菌的黏附结构；②介导细菌在局部定植；③与细菌的致病性密切相关；④性菌毛还能传递细菌的毒力和耐药性。芽胞：具有很强的抗高温、抗干燥、抗化学消毒剂和抗射线能力。
G+菌和G-菌细胞壁的结构由哪几部分组成？革兰阳性菌： 由肽聚糖和磷壁酸组成。其中肽聚糖又由聚糖骨架、四肽侧链、五肽交联桥构成三维立体结构。革兰阴性菌：由肽聚糖和外膜组成。肽聚糖仅由聚糖骨架、四肽侧链构成二维平面结构。
G-细胞壁组成:结构复杂,由肽聚糖和外膜组成,外膜是特有的成分.1肽聚糖:G-有1-2层的肽聚糖结构,肽聚糖仅由聚糖骨架和四台侧链两部分组成.2外膜:位于肽聚糖层的外侧,包括脂蛋白,脂质双层和脂多糖三部分.脂多糖由三部分:脂质A,核心多糖,特异多糖.
内毒素和外毒素的主要区别:内毒素:G-,存在于细菌细胞壁,菌体裂解后释放出来,化学成分主要是脂多糖,稳定性较强,但毒性较弱,各种菌内毒素毒性作用大致相同,引起发热,微循环障碍,内毒素休克,DIC.外毒素来源于G+,是从活菌分泌出或细菌溶解后散出的,主要成分是蛋白质,稳定性较弱,而毒性较强,各种细菌外毒素对机体组织器官有选择性的毒害作用,引起特殊的临床症状.
青霉素和溶菌酶为什么不能杀灭革兰阴性菌？G-有外膜阻止抗菌素进入；保护细胞壁组分肽聚糖不受溶菌酶分解。 简述革兰染色法操作步骤：① 结晶紫初染 ② 碘液媒染 ③ 95% 乙醇脱色 ④ 稀释石炭酸复红复染。革兰染色法的意义：① 鉴别细菌 ② 选择抗菌药物 ③与致病性有关。
细菌的生长繁殖条件是什么？1营养物质: 水,碳源,氮源,无机盐, 生长因子。2氢离子浓度（pH）:大多数病原菌最适pH为 7.2～7.6。3温度: 病原菌最适生长温度是 37℃。4气体: 指氧气或二氧化碳。5.渗透压。
什么是细菌生长曲线？细菌生长曲线分哪4个阶段？以培养时间为横坐标，培养物中活菌数的对数为纵坐标绘制出的一条曲线称作生长曲线。分四期：① 迟缓期 ② 对数期（形态染色、生化反应典型，常用于医学研究）③ 稳定期（毒素、抗生素、芽胞产生期）④ 衰亡期。 细菌根据对氧的需要程度分为哪几种类型？ 1）专性需氧菌2）专性厌氧菌3）兼性厌氧菌4）微需氧菌
细菌合成代谢产物有哪几种？1热原质、2毒素及侵袭性酶、3 色素、4 抗生素、5 细菌素、6 维生素。
什么是培养基及分离培养,简述细菌在培养基上的生长状态。培养基：指由人工方法配制的，将细菌所需要的各种营养物质合理地配制成为细菌生长繁殖的基质。分离培养：将标本或培养物划线接种在固体培养基的表面，因划线的分散作用，使许多原混杂的细菌在固体培养基表面上散开。固体培养基中生长形成菌落；半固体培养基中生长情况 有鞭毛细菌：扩散生长，周围浑浊无鞭毛细菌：沿穿刺线生长，周围透明；液体培养基中生长现象: 混浊：大多数细菌;沉淀：链状生长的细菌; 表面生长：专性需氧菌，如结核杆菌、枯草杆菌
葡萄球菌的分类、主要致病物质及所致疾病?根据色素、生化反应分金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌；根据有无凝固酶分：凝固酶阳性菌株、凝固酶阴性菌株。致病物质：1酶：凝固酶；2毒素：葡萄球菌溶素、杀白细胞素、肠毒素、表皮剥脱毒素、毒性休克综合征毒素-1(TSST-1)。所致疾病：1、侵袭性疾病：局部感染、全身感染；2、毒素性疾病：食物中毒、假膜性肠炎、烫伤样皮肤综合征、毒性休克综合征。
链球菌的分类、主要致病物质所致疾病？1) 根据溶血现象分类: 甲型溶血性链球菌，乙型溶血性链球菌，丙型链球菌；2）抗原结构分类：A—H,K—V20个群；主要致病物质：1胞壁成分： M蛋白 、脂磷壁酸、肽聚糖、细菌胞壁受体；2外毒素：链球菌溶素、致热外毒素；3酶：透明质酸酶、链激酶、链道酶。所致疾病：1化脓性感染：丹毒、蜂窝组织炎淋巴管炎、脓包疮等；2中毒性疾病： 猩红热、毒性休克综合症；3超敏反应性疾病：急性肾小球肾炎风湿热
肺炎链球菌与甲性溶血性链球菌的区别方法？共同点:菌落周围有1~2mm宽的草绿色溶血环。但肺炎链球菌能分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖和蔗糖等，产酸不产气。大多数菌株能分解菊糖和能被胆汁溶解，所以常以此鉴别肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌。
淋球菌和脑膜炎球菌的致病物质及所致的疾病：淋球菌致病物质：菌毛、外膜蛋白、脂多糖、IgA1蛋白酶。所致疾病：淋病。脑膜炎球菌致病物质：1侵袭力：荚膜和菌毛；2毒素：内毒素。所致疾病：流行性脑脊髓膜炎。
动物源性细菌的种类和所致疾病:1布氏杆菌:布氏菌病2鼠疫杆菌:鼠疫3炭疽杆菌:炭疽病4小肠结肠炎耶氏菌:小肠结肠炎5蜡样芽胞杆菌:食物中毒,外伤后全眼球炎6土拉佛氏菌:土拉佛氏病 简述肠道杆菌的共同特性。1）.形态结构：中等大小G－杆菌，多数有菌毛和周鞭毛，少数有荚膜，无芽胞。2)培养：营养要求不高；常用EMB或SS选择鉴定培养基。液体培养基中浑浊生长。3）生化反应:乳糖发酵试验可初步鉴别肠道致病菌(不发酵乳糖)和非致病菌4）抗原结构:主要有菌体O抗原，鞭毛H抗原，荚膜Ｋ抗原。5）抵抗力：对理化因素抵抗力不强。6）变异性：S-R变异、耐药性变异等。
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